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你知道熒光素鉀鹽適合做哪些實(shí)驗(yàn)么

 更新時間:2019-12-13 點(diǎn)擊量:1124
   你知道熒光素鉀鹽適合做哪些實(shí)驗(yàn)么?

  熒光素鉀鹽和5-氟-熒光素,作為Luciferase的作用底物,常用于以下實(shí)驗(yàn):

  1. 報告基因分析

  2. In vivo imaging (動物活體成像)

  3. In vitro imaging (細(xì)胞體外分析)

  4. ATP測定

  5. 其它luciferase及其基因相關(guān)的分析和研究工作

  2、熒光素鉀鹽應(yīng)用于活體成像的基本原理

  細(xì)胞中D-熒光素酶參與的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)遵守酶促反應(yīng)的基本原理,在底物D-熒光素鉀過量的情況下,反應(yīng)產(chǎn)生的光子數(shù)(發(fā)光量)與細(xì)胞中的D-熒光素酶的量成正相關(guān),從而可以推算出細(xì)胞的數(shù)量。

  3、D-熒光素鉀鹽溶液的穩(wěn)定性

  D-熒光素鉀鹽易溶于水和緩沖液,溶解度可高達(dá)25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。

  溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時間對其保存過程中的穩(wěn)定性非常重要。當(dāng)溶液的pH<6.5(發(fā)生水解作用)或>7.5(發(fā)生消旋化作用,D型轉(zhuǎn)化為L型)的情況下,D-熒光素鉀鹽相對不穩(wěn)定。如果溶液中存在少量的氧氣,將加速D-熒光素鉀的降解速度。

  熒光素鉀鹽配成溶液后,在的保存條件(-80°C,pH,無氧氣)下,存在固定的降解速度:0.2%/天,因此配成溶液保存的D-熒光素應(yīng)盡量在1年內(nèi)使用完。

  有水存在的情況下,主要發(fā)生消旋化作用,即D-熒光素轉(zhuǎn)化成L-熒光素,有報道稱L-熒光素對熒光素酶催化的酶促反應(yīng)有抑制作用。

  4、D-熒光素、D-熒光素鈉和D-熒光素鉀之間的區(qū)別

  主要區(qū)別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高,且溶解速度較快,故在一般的生物學(xué)試驗(yàn)中常用D-熒光素鉀鹽。

  5、熒光素鉀鹽的保存和運(yùn)輸條件

  保存條件:≤-20°C,避光,保持干燥。(在不打開包裝的條件下,可保存兩年時間)。

  運(yùn)輸條件:高純度的D-熒光素鉀鹽可在短時間內(nèi)常溫條件下保存,運(yùn)輸條件為常溫。

  原裝(沒有打開包裝)熒光素的包裝瓶中充有氬氣,保證其穩(wěn)定性,打開包裝后,請嚴(yán)格按照保存條件保存。

  D-熒光素鉀鹽具有易溶于水的特性,其暴露于空氣中,易吸潮。在稱量過程中,請考慮其易吸潮的特性,先進(jìn)行溫度平衡,再快速稱取

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